【评测】细胞冻存液种类(干细胞冻存价格)

原标题：【评测】细胞冻存液种类

目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。

因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。 通常采用甘油或二甲基亚砜（DMSO）作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。

BUT，对于药用级、或者免疫细胞等特殊场合的研究中，采用甘油或二甲基亚砜（DMSO）作保护剂可能任然不能使用条件：

无血清细胞冻存液，通用于人和各种动物细胞株。特别配方（主要成分为DMSO和氨基酸）具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力。不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染，确保冻存细胞安全。既适用于一般培养细胞的冻存，也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。

特点

·不含动物源成分，病毒、霉菌和支原体等污染可能性低，各批产品之间有更高的产品质量一致性。

·成分明确，无批次差异。

·可直接存放于-80℃冰箱冻存，无需经过费时的程序降温过程（省时、省力、省钱）。

独特配方有效提高细胞冻存存活率及复苏率

即用型，无需现配，即开即用

通用型，适用于冻存各种细胞系，原代细胞

可微量，原位冻存，例如杂交瘤细胞的冻存，省时高效

存储条件

储存于4℃以下,质量保障期从产品的生产日期起，为期两年。3个月以上没有使用冻存液计划时，尽可能-20℃冷冻保存。为避免重复冻融过程可能导致的冻存液品质下降和性能降低，推荐将产品分装成小管后，再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。

冻存细胞复苏步骤：

1、 从冰箱中取出冻存的细胞，立即置于37℃水浴槽中快速解冻。

2、 待冻存管中的细胞混合液完全融化后，立即加入1ml细胞培养基于冻存管中与细胞混合，将其中的混合液移至含有约5ml该细胞培养基的离心管中，1000rmp离心5分钟，收集冻存细胞沉淀，移去上清液（注意勿将细胞沉淀倒掉）。

3、 加入适量的新鲜培养基，使用移液管缓缓加入细胞沉淀中，轻柔混匀，将混匀好的细胞移至事先准备好的培养容器中。

4、 镜检观察，待细胞状态恢复后可进行其他研究或者培养处理。

原位复苏方式：

1、从冰箱取出冻存培养板，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

2、待冻存的细胞悬液完全融化后，轻轻吸去细胞冻存液，按照常规换液操作加入新鲜培养基继续进行培养。

细胞冷冻保存方法

冻存管冻存方式：

1、按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。

2、按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。（参考：5×105至5×106cells/ml）。

3、取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量，置于离心管中，离心收集培养细胞（参考离心条件：1,000~2,000 rpm，4℃，3~5 min）。移去离心管中的上清液。

4、加入适量无血清细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢混合均匀，制成细胞混合液。

5、将离心管中的细胞混合液分装于已标示的冷冻保存管中建议每管 1ml或1.5ml。。

6、直接将含细胞悬液的冻存管放入-80℃冰箱，冷冻保存。

原位冻存方式：

1、从培养状态良好的细胞培养板中将培养基上清吸取干净。

2、加入适量无血清细胞冻存液于培养孔板中，充分浸润细胞。

3、盖上盖板，做好密封措施，防止染菌。

4、直接将含冻存液的细胞培养板放入-80℃冰箱，冷冻保存。

注意事项：

1. 冻存液在冻存细胞分装后，应减少在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱。

2. 选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。

3. 对于干细胞（ES细胞），原代细胞等冻存时，我们建议事先对所冻存的细胞进行至少为期一周的干产品试验性细胞冻存培养，确认性能后在进行正式冻存。

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